胚胎玻璃化冷冻具体操作步骤是什么

胚胎玻璃化冷冻指将胚胎保存在零下196℃的液氮中,以备日后解冻使用,其可以最大可能保存胚胎活力与质量。冷冻的具体操作步骤分为3步,首先是将胚胎进行脱水皱缩,避免因为胚胎内水含量太多冷冻形成冰晶影响质量;然后把含有胚胎的冷冻液装入载杆;最后将其和载杆一同放入液氮罐中,并封罐保存,保存管理得当可以冷冻10年以上。

胚胎冷冻需要先脱水

胚胎冷冻就是将早期胚胎,采用特殊的保护剂和降温措施进行冷冻,使其在 -196℃的液氮中代谢停止或者减弱到足够小的程度,但又不失去升温后恢复代谢的能力,从而能长期保存胚胎的一种生物技术。目前胚胎冷冻的方法有三种,分别是常规缓慢冷冻、一步冷冻法、玻璃化冷冻法。而胚胎玻璃化冷冻的具体操作步骤分为三步,具体如下:

1、脱水处理

首先会把胚胎放到冷冻保护液里面,对它进行脱水过程也就是皱缩过程,这个过程主要是为了避免后期冷冻因为含水量太多、液体量太多导致冰晶形成,而对胚胎带来损伤。

胚胎玻璃化冷冻需要选择4细胞及以上的Ⅰ-Ⅲ级,可利用卵裂期胚胎进行冷冻,其中Ⅰ级和Ⅱ级胚胎为优质胚胎。冷冻液在室温下平衡至少30min,将胚胎置于玻璃化冷冻平衡液中平衡10min,待细胞内水分和冷冻保护剂充分置换后,转入玻璃化冷冻液中平衡,1min内移至冷冻载杆上并迅速投入液氮中保存。

2、装入载杆

囊胚进行脱水皱缩处理以后,需要把含有胚胎的冷冻保护液放到专门进行胚胎冷冻的载杆上,基本上每个生殖中心进行囊胚冷冻处理时都会有这个步骤。

3、放入液氮

将囊胚装载完之后,需要小心谨慎的放到液氮中,也就是-196℃的环境中进行冷冻保存,然后将储罐的盖子盖好,并每24小时监测液氮水平,确保冷冻胚胎不会受温度变化的影响。